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VigeneFection使用说明书




一、性能参数


产品名称:VigeneFection 简称“VGF”     产品货号: FH880806

浓度:1μg/μl                          推荐使用浓度:1μg-10μg/ml

规格:50μl (赠送)                    保存条件:2-8℃ ,切勿放-20℃

有效期至: 18个月                       运输条件:常温运输

使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床。


二、产品详细描述


1、产品说明


VGF(质粒转染试剂)是一种多聚阳离子聚合物,具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,经进一步的改性后,其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低。


 2、主要特点


·  高效转染各种贴壁细胞。

·  对悬浮细胞有很高的转染效率。

·  在同类产品中具有较高的转染效率和较低的毒性。

·  有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。

·  可用于单个质粒或多个质粒共转。

·  转染24-72小时后,有高的蛋白表达量。


     3、注意事项


 推荐在混合前使用Opti-MEM (Cat. No. 267485)或DMEM细胞培养基(Cat. No. SH30022.01B)稀释VigeneFection 和核酸。

· 转染过程中勿向培养基中添加抗生素,以免造成细胞死亡。

· 不同批次实验请保持细胞接种条件相同。

·  转染前细胞的状态好坏对最终的转染效果高低影响很大,请务必保证转染前,细胞处于良好的生长状态。


三、质粒转染步骤


所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞,其他培养材料,请参考表1按照转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与VigeneFection(μg)的比值为1:3或1:4,转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。

1、贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中,在转染时细胞可长至90-95%融合。 

   悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。


2、转染液制备,每孔细胞用量如下: 

A. 用50μlDMEM培养基(或者其他无血清培养基)稀释质粒DNA,轻轻混匀。

B. 取适量VigeneFection 在50μl DMEM培养基中稀释,室温孵育5min。

C. 将前两步所稀释的DNA和VigeneFection 混合,轻轻混匀,室温放置30min。


3、在每孔细胞中加入混合后的转染液,轻轻摇匀。


4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基,悬浮细胞可在转染后的18-48h之间,对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后24-72h收集培养液。


5、对于稳定转染,在转染24h后以1:10传代培养,第二天可加入选择培养基。


1  各种细胞培养板转染推荐用量

培养皿/

表面积(cm2)

种板密度

培养液

混合液

质粒

VGF

10cm

60

2-3×106cell/dish

10 ml

2×500μl

10μg

30-40 μl

60mm

20

8-10×105cell/dish

3 ml

2×150μl

3μg

9-12 μl

6

10

2-3×105cell/well

2 ml

2×100μl

2.5μg

7.5-10 μl

12

4

1-3×105cell/well

1 ml

2×50μl

1μg

3-4 μl

24

2

0.5-2×105cell/well

0.5 ml

2×25μl

0.5μg

1.5-2 μl

96

0.3

1000-100000cell/well

0.1 ml

2×5μl

0.1μg

0.3-0.4 μl


下图为我公司VGF试剂与其他转染试剂在不同细胞中的对比图


左图为我公司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HEK293细胞时的对比实验,实验结果表明,我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂转染效率;

右图为我司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HepG2细胞时的对比实验,实验结果表明,我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂的转染效率。




        

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