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PLM-Puromycin试剂说明书


一、产品概述:


产品名称: PLM-Puromycin 试剂      产品货号:FH880802 

规格:100μl(标准规格)          浓度:1ug/ul 

推荐使用浓度:1-10 μg/ml      

有效期至:


二、产品原理:


PLM-Puromycin试剂是一种由链霉菌中获取的氨基糖苷类抗生素,具有与tRNA分子3’末端类似的结构,可以和核糖体的A位点结合,从而抑制蛋白质合成对革兰氏阳性菌产生抑制作用。可用作筛选含该抗生素的基因质粒,细胞株构建,也可当做抗菌类抗生素使用。


三、储 存:


保存条件: -20℃或4℃避光保存,尽量避免反复冻融。   

运输条件:4℃以下低温运输


四、使用说明


以验证目的质粒是否具有Puromycin 抗性为例说明本试剂的应用:


      1.  转染前一天铺HEK293细胞,培养基为含10% FBS 的DMEM培养基,以6 well plate为例,细胞数目约为0.5x106 cells。


      2.  在无菌管中加入目的DNA质粒(1-2 ug)及无血清的DMEM或者Opti-MEM。


3.在无菌管中加入无血清的DMEM或者Opti-MEM及本公司VGF转染试剂4 -10 ug。


4.将2和3步中的溶液混合,室温放置20-30min。


5.将4步所得混合液逐滴加入至6 well plate中。


6.转染48h后,吸弃完全培养基,加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml。


7.再培养48h后,观察细胞状态,不含嘌呤霉素的细胞会飘起死亡,转入含嘌呤霉素抗性质粒的细胞则贴壁生长。再次吸弃完全培养基,加入终浓度为1-10 ug/mlPLM-Puromycin试剂的完全培养基2ml,继续杀死无嘌呤霉素抗性的细胞。


8.再培养48h,若细胞仍然贴壁生长且几乎长满,结果说明我们的目的质粒含有嘌呤霉素抗性基因,否则目的质粒不含嘌呤霉素抗性基因。


注意事项筛选细胞时,细胞接种密度不能过大,以免影响筛选效率。当细胞密度比较大时,可加本试剂反复筛选,直至对照细胞完全死亡。建议的一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-10 μg/ml,使用前要做浓度筛选,选择最佳浓度。


声明:本试剂仅供于我公司的产品搭配使用,和其他公司产品搭配使用所产生的一切后果均与我公司无关,本产品的最终解释权归我公司所有。 




        

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