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细胞培养那点事儿(技巧篇)


       在细胞培养实验中,大家总会遇到各种形形色色的问题,比如说不知道该如何操作,该注意什么问题,那么现在,我们一起来学习下在细胞培养中你应当知道的实验小技巧。


一、无菌意识要强


       细胞培养中最重要的就是要保证无菌条件,这是培养成功的大前提。主要包括,器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的消毒与杀菌等


1、实验进行前后,超净台以紫外灯至少照射30分钟灭菌,以70%乙醇擦拭无菌操作台,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,再开始实验操作。


2、确保每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%乙醇擦拭无菌操作台面。


3、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后再带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。


4、小心取用无菌实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。


5、为避免污染,尽量不要和别人共用试剂耗材,最好自己准备一套。


6、水浴锅中添加灭菌水,并注意经常更换。


二、正确选择、保存血清和培养基


       在细胞培养中,特别需要注意的是,血清和培养基的选择和处理非常重要

       目前用于细胞培养的血清主要是牛血清,如小牛血清和胎牛血清等,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等,建议您根据所培养的细胞选择适合的血清。解冻血清时需采用逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),在4℃冰箱全溶后再根据实验需求进行分装保存。需要长期保存的血清必须储存于-20℃或-80℃低温冰箱中。在4℃冰箱中保存时间请勿超过1个月,且最好不要血将清置于室温环境中,室温放置太久血清会变得浑浊,且血清营养成分可能损坏。


       注意:热灭活会使血清沉淀物增多,若无必要可省略此步,若必须热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。


       另外,不同的细胞可能培养基不同,细胞培养时需选择适合的培养基。针对不同的细胞培养的需求,有高糖培养基和低糖培养基,特殊培养基和干粉培养基等。细胞培养基的储存条件是2℃-8℃,一般置于4℃冰箱保存即可。培养基容易氧化,PH升高,因此打开后最好不要长时间放置不用,此外,还需要具体情况决定添加抗生素和其他细胞培养添加剂等。


三、试剂的分装保存


       为保证试剂能保持最佳的营养和活性,血清、培养基、胰酶等试剂最好小剂量分装保存,同时,降低污染的风险。


四、培养注意事项


1、根据每种细胞自身的特点,合理把握吹打的力度、胰酶消化时间、细胞传代换液时间等;

2、动作要快,细胞暴露在空气中的时间越少越好;

3、冻存复苏的原则:慢冻快融;

4、冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基;

5、养成定期保种的好习惯;





        

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